注:▲顺行灌注组与逆灌注组差别无统计行意义 (P>0.05);△顺行灌注组与逆行灌注组差别有统计意义 (P<0.05)
二组兔肾在光镜下可见逆行灌注组近端小管上皮细胞轻度肿胀,肾小管结构完整,远端小管管腔扩张,部分细胞可见胞浆内空泡形成,组织周围渗出较顺行灌注组损伤轻。
3 讨论
从解剖学的观点来说,肾实质内静脉无节段性 , 各肾段之间存在丰富的吻合,经肾静脉灌注,如多支肾静脉,即使一支肾静脉畸形、损伤或太细,从另一支肾静脉灌注,也能迅速灌白整个肾脏。肾动脉在肾内的分布呈节段性,一般分为 5 个肾段,肾段之间的动脉缺乏交通支,当一支段动脉梗塞后可造成该肾段的坏死。
肾静脉逆行灌注肾脏可以更完全把兔子肾脏里血液灌注出来,减少血栓的形成,可以弥补由于肾动脉多支变异或畸形、狭窄、硬化等不易灌注的缺点。本实验采用原位逆行灌注兔子肾脏后的缺血再灌注损伤的方法,不需阻断腹主动脉和腔静脉,对兔子的生理干扰小,成功率高,可以较准确地观察肾脏缺血再灌注损伤术后的功能变化,为肾移植基础研究提供稳定、可靠的动物模型。我们实验兔子的右肾是在左侧肾脏开放循环时切除的,这样更准确观察左肾功能的变化情况。兔子的左肾静脉有一支腰背静脉,较粗,为避免肾静脉缝合后引起狭窄,我们分别在顺、逆行灌注组把左腰背静脉分离出来作为灌注液出口或灌注口,并在靠近肾静脉处留置结扎线,待灌注结束后结扎。
本实验灌注后动脉缝合时间一般为 2 min 左右,肾静脉不需缝合,直接把留置在左腰背静脉处的结扎线打结即可。各组肾脏缺血时间为 60 min,且除左侧肾脏缺血外,全身各组织、器官都没有太大影响,肾功能检测结果显示,术后兔肾血清 BUN、Cr 均显著升高,肾组织学检查可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀,部分肾小管凝固性坏死,肾小管腔内可见到管型,说明肾 IRI 模型复制成功。实验结果表明,两组兔SCr、BUN 都在第 3 天升到最高,第 5 天都基本降到了正常值,在第 3 天逆行灌注组与顺行灌注组相比,顺行灌注组兔SCr、BUN 水平显著升高,肾组织病理学及电镜也改变明显(P<0.05); 第 7 天两组兔 SCr、BUN 都恢复到了正常值,肾组织病理学及电镜显示:逆行灌注组比顺行灌注组损伤轻,差异有统计学意义 (P<0.05),与尹明等研究结论相一致。IL-1 是一种在炎症反应中最早出现的、发挥前炎症因子作用的反应强烈的细胞因子。目前已证明 IL - 1 在各种缺血再灌注损伤中起着重要作用。Furuichi 等研究证明在肾脏缺血再灌注损伤时 IL-1 的表达明显升高 ,但 IL - 1 在缺血性肾损伤中的具体作用机制还不十分明确 , 我们只做了兔子肾缺血再灌注 24 h 血液 IL-1 的浓度 , 顺行灌注组与逆行灌注组比较 ,异有统计学意义 (P<0.01) ,这表明逆行灌注较顺行灌注更有保护作用。
本实验只做了动物实验的初步研究,逆行灌注法对肾功能方面的保护需我们做进一步的基础及临床研究。