前 言
胆碱酯酶(cholinesterase)是催化酰基胆碱水解的一类酶,根据底物及分布部位等特性可将胆碱酯酶分为两大类,一类为乙酰胆碱乙酰水解酶(acetylcholineacetylhydrolase,EC3.1.1.7),又称乙酰胆碱酯酶、真性胆碱酯酶、红细胞胆碱酯酶、胆碱酯酶Ⅰ,主要分布于红细胞表面及神经突触处;另一类为酰基胆碱酰基水解酶(acylcholine acylhydrolase,CHE,EC3.1.1.8),又称丁酰胆碱酯酶、假性胆碱酯酶、血清胆碱酯酶、胆碱酯酶Ⅱ,主要分布于肝脏、胰脏、心脏、脑白质、血清中[1]。
……
1 材料
1.1 实验材料
……
2 方法
2.1 CHE 测量参考方法建立的技术路线
CHE 测量候选参考方法建立的技术路线见图 1:
图 1 CHE 测量参考方法建立的技术路线
2.2 实验方法
3结果 ……32
4 讨 论
临床酶学标准化是目前解决临床酶催化活性测定结果在实验室间、各测量方法间缺乏可比性、互换性以及正常人参考范围混乱的有效途径。自上世纪 70 年代起,IFCC便公布了 GGT、ALT、AST 等酶的催化活性浓度测量参考方法,但至今仍无公认的CHE 催化活性浓度测量参考方法[37]。由于各学术组织及各国临床化学协会观点不同,以及方法学研究实验的结果差异等原因,造成 CHE 催化活性浓度测量方法繁多和参考范围混乱的局面。因此本研究收集近 20 年来 CHE 测量方法文献,分析不同被测量的测量方法,根据其测量方法标准化、自动化的可行性、试剂来源与成本等条件,筛选适合作为测量 CHE 的被测量,并针对筛选的被测量分析其应用最为广泛的几种CHE 测量方法,根据胆碱酯酶测量方法的优越性、测量方法的市场占有率、各测量方法的试剂来源及成本等因素,筛选 CHE 测量参考方法的候选测量原理,并购买相应原理试剂盒进行精密度与线性性能评价,以其中性能良好的检测系统的测量原理为CHE 测量参考方法的测量原理。根据对酶学测量的基础理论、酶学测量参考方法的研究现状、胆碱酯酶催化活性浓度测量的原理和特点的理论研究及单因素实验方法选择 CHE 测量参考方法的测量因素及试剂因素的测量条件,尝试以 RSM 对 CHE 测量方法的关键影响因素进行优化,最终建立 CHE 测量参考方法。
5 结 论
成功建立了胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法,并建立了单因素联合响应面分析法的酶催化活性浓度测量方法的研究路径。
参考文献(略)